Extraction d'ADN génomique

Voici le Voici le protocole permettant d’extraire l’ADN génomique de plantules d’Arabidopsis thaliana. Attention, dans ce protocole, nous utiliserons du phénol, un produit corrosif et toxique. Il est très important de l’utiliser sous-hotte et de porter des gants pour le pipetter. permettant d’extraire l’ADN génomique de plantules d’Arabidopsis thaliana.

  1. Couper 1 cm^2 de feuille d’Arabidopsis. Vous pouvez prélever 2 plantes par groupe, dont les ADN génomiques seront extraits indépendamment.
  2. Introduire chaque morceau de feuille dans des tubes Eppendorf (1,5 ml) séparés et contenant 100 µl de tampon d’extraction (100 mM Tris-HCl (pH 9.5), 1 M KCl, 10 mM EDTA).
  3. Broyer la feuille dans le tampon à l’aide d’un piston.
  4. Incuber 10 min. à 95°C sur un bloc chauffant.
  5. Sous hotte : Ajouter 50 µl de phénol/chloroforme [Phénol/chloroforme/alcool isoamylique (25:24:1)] et vortexer 10 sec.
  6. Centrifuger 2 min. à 13.000 rpm.
  7. Transférer la phase aqueuse (celle du dessus, le phénol reste dans la phase du dessous) dans un nouvel Eppendorf de 1,5 ml. Attention à ne pas toucher l’interphase séparant les solutions
  8. Ajouter 100 µl d’isopropanol et mélanger par inversion (3x).
  9. Centrifuger 10 min. à 13.000 rpm.
  10. Éliminer le surnageant à l’aide d’un tips.
  11. Laisser sécher le tube ouvert 5 à 10 minutes.
  12. Resuspendre le culot d’ADN dans 50 µl d’eau. Attention à ne pas contaminer l’eau stérile, elle servira aussi comment témoin de la PCR !